Kod osjetljivih biljaka inhibiraju aktivnost enzima 5-enolpiruvilšikimat-fosfat (EPSP) sintetaze koja producira EPSP iz šikimat-3-fosfata i fosfoenolpiruvata u metaboličkom putu šikimske kiseline. ESP inhibira korištenje aromatičnih aminokiselina triptofana, tirozina i fenilalanina koje su neophodne za sintezu proteina ili za biosintetski put rasta, zbog čega su razvrstani u HRAC grupu G (9). Dodavanjem ovih aminokiselina egozgeno, potpuno se zaustavlja toksičnost glifosata na više biljke što ukazuje da je inhibicija sinteze proteina involvirana u ove efekte.
Jedini predstavnik ove grupe je totalni herbicid, koji je izraziti sistemik s translokacijskim djelovanjem na jednogodišnje i višegodišnje korova. Ne ostavlja rezidue u tlu. Ne kontaminira vode. U procesu metabolizma glifosat se u biljkama polako metabolizira do aminometilfosfonske kiseline. Rabi se za suzbijanje korova, u višegodišnjim nasadima, vodotocima, na željezničkim prugama, putovima u naseljenim mjestima i sl. Masovno se rabi u genetski modificiranim biljkama.
